分光光度法是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度,对该物质进行定性和定量分析的方法. 　　在分光光度计中,将不同波长的光连续地照射到一定浓度的样品溶液时,便可得到与众不同波长相对应的吸收强度.如以波长（λ）为横坐标,吸收强度（A）为纵坐标,就可绘出该物质的吸收光谱曲线.利用该曲线进行物质定性、定量的分析方法,称为分光光度法,也称为吸收光谱法.用紫外光源测定无色物质的方法,称为紫外分光光度法；用可见光光源测定有色物质的方法,称为可见光光度法.它们与比色法一样,都以Beer-Lambert定律为基础.上述的紫外光区与可见光区是常用的.但分光光度法的应用光区包括紫外光区,可见光区,红外光区. 　　分光光度法注意事项 　　使用的吸收池必须洁净,并注意配对使用.量瓶、移液管均应校正、洗净后使用. 　　取吸收池时,手指应拿毛玻璃面的两侧,装盛样品以池体的4/5为度,使用挥发性溶液时应加盖,透光面要用擦镜纸由上而下擦拭干净,检视应无溶剂残留.吸收池放入样品室时应注意方向相同.用后用溶剂或水冲洗干净,晾干防尘保存. 　　供试品溶液浓度除各该品种已有注明外,其吸收度以在0.0.7之间为宜. 　　测定时除另有规定外,应以配制供试品溶液的同批溶剂为空白对照,采用1cm石英吸收池,在规定的吸收峰±2nm以内,测几个点的吸收度或由仪器在规定的波长附近自动扫描测定,以核对供试品的吸收峰位置是否正确,并以吸收度最大的波长作为测定波长,除另有规定外吸收度最大波长应在该品种项下规定的测定波长±2nm以内. 　　供试品应取2份,如为对照品比较法,对照品一般也应取2份.平行操作,每份结果对平均值的偏差应在±0.5%以内. 　　选用仪器的狭缝宽度应小于供试品吸收带的半宽度,否则测得的吸收度值会偏低,狭缝宽度的选择应以减少狭缝宽度时供试品的吸收度不再增加为准,对于大部分被测品种,可以使用2nm缝宽. 　　工作曲线不过原点的可能的原因是参比溶液选择不当